Mae pecyn ELISA yn seiliedig ar labelu cyfnod solet o antigen neu wrthgorff ac ensymau ar antigen neu wrthgorff. Mae'r antigen neu'r gwrthgorff sydd wedi'i rwymo i wyneb y cludwr solet yn dal i gadw ei weithgaredd imiwnolegol, ac mae'r ensym â label antigen neu wrthgorff yn cadw ei weithgaredd imiwnolegol a'r gweithgaredd ensymau. Ar adeg y penderfyniad, mae'r sbesimen dan brawf (lle mae'r gwrthgorff neu'r antigen yn cael ei fesur) yn adweithio â'r antigen neu'r gwrthgorff ar wyneb y cludwr solet. Mae'r cymhleth antigen-gwrthgorff a ffurfiwyd ar y cludwr solet yn cael ei wahanu oddi wrth sylweddau eraill yn yr hylif trwy olchi.
Ychwanegir antigenau neu wrthgyrff â label ensymau, sydd hefyd yn rhwymo i'r cludwr solet trwy adwaith. Ar yr adeg hon, mae swm yr ensym yn y cyfnod solet yn gymesur â faint o sylwedd yn y sbesimen. Ar ôl ychwanegu swbstrad adwaith yr ensym, mae'r swbstrad yn cael ei gataleiddio gan yr ensym i ddod yn gynhyrchion lliw. Mae swm y cynnyrch yn uniongyrchol gysylltiedig â swm y sylwedd a brofwyd yn y sbesimen, felly gellir cynnal dadansoddiad ansoddol neu feintiol yn ôl dyfnder y lliw.
Mae effeithlonrwydd catalytig uchel ensymau yn chwyddo'n anuniongyrchol ar ganlyniadau'r ymateb imiwn, gan wneud y assay yn hynod sensitif. Gellir defnyddio ELISA i bennu antigenau, ond gellir ei ddefnyddio hefyd i bennu gwrthgyrff.
Egwyddorion sylfaenol pecyn ELISA
Mae'n defnyddio adwaith penodol antigen a gwrthgorff i gysylltu'r gwrthrych ag ensym, ac yna'n cynhyrchu adwaith lliw rhwng ensym a swbstrad ar gyfer penderfyniad meintiol. Gall y gwrthrych mesur fod yn wrthgorff neu antigen.
Mae angen tri adweithydd yn y dull hwn o benderfynu:
â Antigen neu wrthgorff cyfnod solet (arsugnol imiwnedd)
â¡ antigen neu wrthgorff wedi'i labelu ag ensymau (marciwr)
⢠swbstrad ar gyfer gweithredu ensymau (asiant datblygu lliw)
Yn y mesuriad, mae'r antigen (gwrthgorff) yn rhwym i'r cludwr solet yn gyntaf, ond mae'n dal i gadw ei weithgaredd imiwnedd, ac yna ychwanegir cyfun (marciwr) o wrthgorff (antigen) ac ensym, sy'n dal i gadw ei weithgaredd imiwnedd gwreiddiol ac ensym gweithgaredd. Pan fydd y cyfuniad yn adweithio â'r antigen (gwrthgorff) ar y cludwr solet, ychwanegir swbstrad cyfatebol yr ensym. Hynny yw, hydrolysis catalytig neu adwaith a lliw REDOX.
Mae'r arlliw lliw y mae'n ei gynhyrchu yn gymesur â faint o antigen (gwrthgorff) i'w fesur. Gall y llygad noeth arsylwi ar y cynnyrch lliw hwn, gellir hefyd fesur microsgop optegol, microsgop electron, trwy sbectroffotomedr (offeryn label ensym). Mae'r dull yn syml, yn gyfleus, yn gyflym ac yn benodol.